用于紫外可見分光光度計的光度準確度測試的材料, 應該是純度高、穩定性好的物質。這些物質中最主要的是鉻酸鉀( K2 CrO4 , 一般在堿性溶液中)、重鉻酸鉀( K2 Cr2 O7 , 一般在酸性溶液中) 、硝酸鉀、中性濾光片等。在堿性溶液中的鉻酸鉀是一種好材料, 但是因為含有堿性, 不能儲藏在普通玻璃容器中, 而需要儲藏在石英器皿中, 硝酸鉀本身不大穩定。這些都限制了它們的使用。因此, 最好選擇易于純化又溶于酸性介質中的物質, 并且它們的稀溶液也是很穩定的。因此, 重鉻酸鉀的0. 005mol/ L H2 SO4 溶液經常被使用。許多科學家認為, 用紫外濾光片來測試紫外可見分光光度計的光度準確度, 具有很大的優點。因為它們的穩定性更好, 又便于攜帶, 還有許多優點將在后面討論。紫外可見分光光度計的光度準確度測試方法, 目前國內外各生產廠家作法不一, 其主要原因是各國的國家標準不同; 如美國國家標準規定: “選擇合適的標準參比材料, 在規定的波長處, 連續測10 個吸光度或透射比讀數, 取10個讀數的平均值, 實際吸光度或透射比與觀測值的平均值之差, 即為光度準確度”。美國國家標準還規定了計算光度準確度的標準偏差S 的方法; 規定指出吸光度準確度用AA 表示, 則有式( 4-10) 、式( 4-11) 中, S 為標準偏差; Ai 或T i 為每次測量時吸光度或透射比的讀數值; Aa 或Ta 為吸光度或透射比的平均值; n 為測量次數( 一般取5～7 次)。

可見分光光度計光度準確度測試方法" src="../../news/pics/20140220/201402201392880960734.jpg"/>

   美國NBS 規定, 在可見區用930 標準片來測定光度準確度, 其標準透射比值分別為10%、20%、30%的中性玻璃濾光片。規定還指出也可用NBS 的931 , 它是一種溶液。而在紫外區內, 則規定用NBS 的203 來測定光度準確度; 它是一種標準透射比值分別為90%、30%、10% 熔融石英濾光片。此外,美國標準還規定在紫外區內, 用戶還可以自己配置高純度的化合物溶液來測定光度準確度。為此, 美國NBS 已發布了鉻酸鉀(K2 CrO4 )、重鉻酸鉀( K2 Cr2 O7 )等標準物質可供選用。
    我國在1992 年制訂的紫外可見分光光度計國家標準中規定, 用重鉻酸鉀溶液來測試紫外區的光度準確度, 并明確指出了測試波長。在可見光區規定可用中性濾光片來檢測光度準確度, 其標準片的透射比值分別為10%、20%、40%左右; 同時還規定在紫外可見整個區間, 都可用中性濾光片來檢測光度準確度, 其標準片的透射比值也分別為10%、20%、40%左右。
    安徽省計量測試研究所和國家標準物質研究中心共同研制的紫外光區透射比標準濾光片, TA 優于0. 2% , 穩定性優于0. 1% , 其測試波長分別為270nm、293 nm 和350 nm, 相應的透射比標準值各為11. 4%、3. 9%、52. 9%左右。用來測試日本島津公司的UV-260 紫外可見分光光度計和無錫高速分析儀器廠生產的WFZ-753 型紫外可見分光光度計的光度準確度, 具體操作時,以空氣作參照, 對規定的波長處各測7 次, 取其平均值, 與標準值相減, 則得到各規定的波長處的TA 。而后, 取三個規定波長中最差者作為被測紫外可見分光光度計儀器的透射比準確度。再根據式( 4-2 ) , 求得被測儀器在各規定的波長處的透射比準確度, 然后以三個規定波長中的最差者作為被測儀器的透射比準確度。
    影響紫外分光光度計光度準確度的因素很多, 主要因素有雜散光、噪聲、基線平直度、光譜帶寬等, 將在后面討論。