色譜法是一種非自發、 需耗能(由高壓氣體或液體提供)的分離方法。被檢樣品混合物中的不同組分與互不相溶的流動相( mobilephase )和固定相( stationary phase )之間的吸附、溶解、分配或離子交換等相互作用是存在著差異的,當流動相攜帶著多組分混合物流過固定相時,使得性質不同的各個組分隨流動相移動的速度產生了差異，隨著組分在兩相之間持續發生反復多次的作用,原來微小的差異累加產生了很大的效果，從而使各組分在柱內移動的同時逐漸分離。

　　例如某含A、B兩個組分的試樣,已知A組分在固定相中的分配系數(即與固定相的作用力)大于B ,當樣品由流動相攜帶進入填充有固定相的色譜柱頭時( 如圖1-3所示) ,組分A、B是完全相混的。由于A組分在固定相中的溶解能力比B大,故A組分的移動速度慢,經過多次反復分配后,分配系數較小的B組分首先被帶出色譜柱,而分配系數較大的組分A則遲被帶出色譜柱,從而實現了分離。

　　在經典色譜分離中,從色譜柱后流出的各組分用容器一-收集后，供進一步的分析或使用。而在現代色譜儀器分析中,從色譜柱流出的被分離了的組分被流動相”在線”導入檢測器,將各組分的濃度變化用電壓、電流信號記錄下來,直接對每個組分進行定性和定量分析。

　　(a)分配平衡的差異造成的A、 B兩不同組分的差速遷移;

　　(b)A和B在色譜系統中的分離和檢測過程;

　　(C)所記錄的色譜圖(c圖橫坐標t1, t2, ..對應于各自上方b圖中相應的4個分離階段)

　　色譜分離的基本理論

　　色譜分離中,決定相鄰組分分離好壞的因素有兩個:一是兩組分的保留值之差,即組分在色譜柱內遷移速率的差異,它取決于各組分與固定相、流動相的相互作用之差異;二是兩組分的峰寬,它反映了組分區帶在移動過程中的擴張程度，很大程度上取決于色譜的分離條件。圖1-7表示了A、B兩組分在分離過程中的不同時刻在色譜柱內的相對位置和寬度(情況與圖1-3所示相同)。

　　當分離到t2時A與B處于柱子中間部位,兩者譜帶較窄但尚未完全分離;分離到t時,兩組分已接近柱尾，已分離完全,但組分區帶增寬不少。因而,色譜分離條件的優化就是要設法使相鄰兩組分區帶遷移速率有較大的差異，但組分區帶在移動過程中的擴張要盡量小,從而使兩個組分區帶在向柱下游移動時,區帶分開的速度大于它們自身的擴張速度(圖1-7的情況)，這樣當組分區帶從柱后流經檢測器時，可以得到完全分離的兩個峰。