1、由于樣品制備技術(shù)的限制，對大多數(shù)生物樣品來說，一般只能達到2nm的分辨率。
　　2、電鏡圖像的分辨能力不僅取決于電鏡本身的分辨率，而且取決于樣品結(jié)構(gòu)的反差。
　　3、電鏡所用的光源是電子波，波長在非可見光范圍內(nèi)無顏色反應(yīng)，所形成的圖像是黑白圖像，要求圖像必須具有一定的反差。
　　4、生物體組織和細胞成分主要有CHON等輕元素組成，它們的原子序數(shù)較低，電子散射能力弱，相互之間的差別又很小，電鏡下的圖像反差一般較低。
　　5、由于電子束的穿透能力較弱，樣品必須制成超薄切片。
　　6、觀察面小，載網(wǎng)直接能夠為3mm,超薄切片范圍為0.3-0.8mm.
　　7、電子束的強烈照射，易損傷樣品，發(fā)生變形、升華等，甚至被擊穿破裂，可能使觀察結(jié)構(gòu)產(chǎn)生假象。
　　8、觀察時電鏡鏡筒必須保持真空，為了保證樣品在真空下不損傷，對樣品要求應(yīng)無水分。因此，不能觀察活體的生物樣本。
　　9、生物制樣復(fù)雜，在步驟繁多的制樣過程中，樣品容易產(chǎn)生收縮、膨脹、破碎以及內(nèi)含物丟失丟失等結(jié)構(gòu)改變。